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PCR實驗室建設(shè)四要素

來源: 時間:2022-06-11 08:50:26 瀏覽次數(shù):

1、試劑準備區(qū)。


        用于準備試劑。該區(qū)域為正壓,以防止污染物溢出。該區(qū)域可分為三個區(qū)域:普通提取試劑的準備區(qū)。PCR試劑準備區(qū)和PCR主反應(yīng)液準備區(qū)。在普通提取試劑的準備區(qū)準備一些核酸提取所需的裂解液和提取液;PCR試劑準備區(qū)用于制備和保存PCR試劑。例如,準備PCR試劑,如引物和探頭。為了防止交叉污染,避免重復(fù)冷凍和解凍,試劑儲存溶液應(yīng)平均體積小,儲存在該房間后使用:主反應(yīng)混合物(樣品除外)將用于PCR主反應(yīng)液準備區(qū)。將所有PCR所需試劑的混合物添加到PCR管中的操作。重要提示:其他房間的材料(包括膨脹、模板和目標核酸或陽性對照)不得帶入試劑準備區(qū)。


        2、樣品準備區(qū)。


        該區(qū)域沒有壓力設(shè)置要求。該區(qū)域用于分割樣品、研磨、破碎和均勻漿液的區(qū)域。因為在這些破碎、研磨和均勻漿液處理過程中會產(chǎn)生氣溶膠,因此存在陽性樣品污染后續(xù)操作的可能性。該區(qū)域應(yīng)與后面的區(qū)域嚴格隔離,并應(yīng)放置在與后面三個區(qū)域分離的獨立房間中。樣品準備區(qū)還可以設(shè)置專門的封閉區(qū)域或房間,用于接收和存放樣品。這個房間可以放在冰箱里存放樣品,應(yīng)該和樣品準備區(qū)的其他區(qū)域隔離。樣品準備區(qū)域的人員不得進入試劑準備區(qū)域。


        3、核酸提取區(qū)。


        核酸提取區(qū)是從樣品中提取核酸的區(qū)域。該區(qū)域為負壓,以防止核酸溢出造成的污染。樣品準備區(qū)還包括從樣品中提取和純化核酸的區(qū)域,以及將核酸添加到含有PCR主反應(yīng)混合管的操作區(qū)域。添加樣品后,應(yīng)盡快覆蓋PCR管的蓋子。當使用PCR板和橡膠蓋時,陽性控制和包含目標序列的樣品應(yīng)與要測量的樣品分開操作,以避免添加模板時的交叉污染。

重要提示:本房間內(nèi)的所有物品不得帶人試劑準備區(qū)。


        4、擴大和產(chǎn)品檢測區(qū)域。


        該區(qū)域用于PCR擴增和PCR分析。PER儀器被放置在這個區(qū)域。為了防止核酸溢出,房間保持負壓。這個地區(qū)的人bi須一直穿工作服。

        離開房間前脫下手套,防止擴增子污染其他地方。所有用于擴增和產(chǎn)品檢測的設(shè)備都應(yīng)指定用于該房間。PCR分析]di二項工作也設(shè)置在該區(qū)域,如酶切、測序、克隆等,但實驗室應(yīng)盡可能將這些活動與不同的區(qū)域或房間分開。降低擴增產(chǎn)品的污染風險。如果沒有條件在該區(qū)域設(shè)置負壓,則bi須在該區(qū)域設(shè)置排氣裝置。

        重要提示:此房間的物品不能帶人樣品準備區(qū)或試劑準備區(qū)。

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